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腺病毒ADV
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腺病毒（Adenovirus, ADV）是一種無包膜的線性雙鏈DNA病毒，具有廣泛的細胞和組織感染能力。感染過程劇烈，適于短時間內進行基因高表達的實驗，與其它病毒相比，腺病毒優勢在于插入片段較長，表達活性強。
體外應用時，腺病毒載體轉基因效率高（接近100%的轉導效率），且可轉導不同類型的細胞，對于大量難轉染細胞的基因遞送是一個很好的工具。但是，在體內應用時，由于腺病毒免疫原性強，感染劇烈，故常會引起動物局部組織炎癥反應和機體免疫反應，對動物體征和實驗結果的客觀性造成影響。
ADV包裝和侵染過程
腺病毒包裝與純化
腺病毒包裝骨架達質粒與穿梭質粒共轉染HEK-293細胞，待細胞出現CPE狀態后通過收集細胞上清和細胞裂解物，通過濃縮或氯化銫密度梯度離心純化病毒。
CPE（Cytopathic Effect）：病毒對組織培養細胞侵染后產生的細胞變性，利用此種病變效應可進行病毒定量。
腺病毒滴度檢測
檢測方法：酶聯免疫法腺病毒滴度測定，根據計算感染后染成褐色的陽性細胞數，來計算病毒滴度。
實驗原理：腺病毒感染的陽性細胞表達的衣殼蛋白被染成褐色。
檢測方法：免疫顯色方法
實驗原理：通過抗5型腺病毒外殼蛋白的單抗與待感染腺病毒樣品的細胞結合，再用HRP標記的二抗與一抗結合，經顯色液顯色，被感染的細胞變成褐色，根據陽性細胞數，來計算病毒滴度。
腺病毒載體優勢
① 表達快，腺病毒感染細胞后，1-2天即可表達
② 載體容量大，感染效率高，常用于感染難感染的細胞
③ 不整合到染色體中，無插入致突變性
④ 具有嗜肝性，易于感染肝細胞，腺病毒的體內應用是用于感染肝臟
不過由于腺病毒免疫原性高，對某些對外源刺激敏感的動物模型和組織中易造成炎癥，體內應用需謹慎。
不同病毒的生物學特性比較
載體選擇
煊晟興成生物擁有豐富的腺病毒產品，用于操作編碼基因和非編碼基因，如lncRNA、microRNA、circRNA。
以下腺病毒載體可供您選擇：
調控方式 | 載體名稱（載體元件順序） | 真核抗性 | 熒光 | 啟動子 | 默認標簽 | 載體容量 |
過表達 | pADV-mCMV-MCS-3xFLAG | N/A | N/A | mCMV | 3FLAG | >6kb |
pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG | N/A | EGFP | mCMV | 3FLAG | >5kb | |
pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP | N/A | EGFP | mCMV | 3FLAG | >5kb | |
pADV-mCMV-3xFLAG-P2A-EGFP | N/A | EGFP | mCMV | 3FLAG | >5kb | |
pADV-mCMV-mCherry-HA | N/A | mCherry | mCMV | HA | >5kb | |
pADV-mCMV-3xFLAG-T2A-mCherry | N/A | mCherry | mCMV | 3FLAG | >5kb | |
pADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAG | N/A | mNeonGreen | CMV | 3FLAG | >4kb | |
pADV-EF1-mScarlet-CMV-MCS-3xFLAG | N/A | mScarlet | CMV | 3FLAG | >4kb | |
circRNA過表達 | pADV-CMV-S-circRNA | N/A | N/A | CMV | N/A | >5kb |
miRNA過表達 | pADV-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP | N/A | EGFP | U6 | N/A | N/A |
表達cre | pADV-CMV-Cre | N/A | N/A | CMV | N/A | N/A |
干擾 | pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP | N/A | EGFP | U6 | N/A | N/A |
pADV-U6-shRNA-CMV-mCherry | N/A | mCherry | U6 | N/A | N/A | |
CRISPR敲除 | pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-3xFLAG-spCas9 | N/A | N/A | U6 | 3FLAG | N/A |
pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9 | N/A | sfGFP | U6 | 3FLAG | N/A | |
pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP | N/A | EGFP | U6 | N/A | N/A | |
pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-spCas9 | N/A | mCherry | CMV | 3FLAG | N/A | |
pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-eSpCas9_1.1 | N/A | mCherry | CMV | 3FLAG | N/A |
應用實例
1.[腺病毒, 肝臟]
感染部位：肝臟
載體名稱：Ad-CBS
注射方式：尾靜脈
注射量：1 x1011 PFU/mL，10ul
檢測時間：7天
2. [腺病毒, 肝臟]
感染部位：肝臟
載體名稱：Ad-ATG7
注射方式：尾靜脈
注射量：1 x109 PFU /只
檢測時間：10天
3. [腺病毒, 大鼠]
注射部位：大鼠大腦皮層
載體名稱：Ad-FBLN
注射方式：腦立體定位注射
注射量：三種不同劑量
檢測時間：7天
腺病毒的生產和質控采取了國際學術界公認的標準流程，采用AdEasy及Admax腺病毒包裝系統在HEK-293細胞中進行包裝。所獲得的病毒顆粒經過超速密度梯度離心和過濾，并通過殼蛋白免疫法進行滴度測定。一般情況下腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml，完全可以滿足各類實驗的使用要求。